Ementa
| Identificação de células T citotóxicas induzidas com vacinas de DNA baseada | |
| Objetivo Geral | O objetivo do curso é que os alunos aprendam como se pode identificar a presença e ativação de células T através de ensaios in vivo e in vitro. |
| Objetivos Educacionais/Aprendizagem | Espera-se que ao final do curso o aluno aprenda as bases teóricas para clonagem e purificação de vacinas de DNA, imunização de camundongos, realização de ensaios para avaliação de ativação de células T in vivo com transferência adotiva de células, estimulação de esplenócitos in vitro e avaliação por citometria de fluxo utilizando anticorpos contra diferentes marcadores celulares. Espera-se que ao final do curso o aluno esteja habilitado a purificar vacinas de DNA e imunizar camundongos, realizar ensaios de avaliação de citotoxicidade in vivo com transferência adotiva de células, estimular esplenócitos in vitro e avaliação por citometria de fluxo utilizando anticorpos contra diferentes marcadores celulares. |
| Metodologia | O aluno irá apresentar e assistir seminários utilizando as plataformas Zoom / Skype, baseados em artigos científicos e nos resultados obtidos pelo grupo. Prática: Purificação em larga escala de vacinas de DNA (plasmídeo) por coluna de troca iônica e avaliação de integridade por digestão com enzimas de restrição e eletroforese; imunização de camundongos por via intramuscular, isolamento de esplenócitos, marcação de esplenócitos com molécula fluorescente (CFSE), pulsar células alvos com peptídeos selecionados, transferência adotiva de células em camundongos imunizados, desafio de camundongos com vírus Dengue, estimulação de esplenócitos com diferentes peptídeos e marcação com anticorpos contra diversos marcadores celulares, avaliação por citometria de fluxo. |
| Detalhamento da carga horária / Conteúdo Programático | Conteúdo prático: 2 h semanais para participação em seminários; 1 h semanal para apresentação e discussão de resultados obtidos pelo aluno e pelo grupo. Conteúdo teórico: 18 h semanais como descrito abaixo: Análise por bioinformática para determinação das sequências a serem clonadas, clonagem de genes, seleção dos clones recombinantes, sequenciamento, purificação em grande escala da vacina de DNA, avaliação de integridade do plasmídeo- 160 hrs munização de camundongos, desafio de camundongos com diferentes vírus, isolamento de esplenócitos, marcação de células alvos com uma molécula fluorescente e pulsadas com peptídeos, transferência adotiva de células, estimulação in vitro com diferentes peptídeos, marcação de células com anticorpos contra diferentes marcadores celularesavaliação por citometria de fluxo, desafio de camundongos com o vírus Dengue, isolamento de esplenócitos, contidos na proteína NS1 do vírus Dengue, , identificação dos tipos celulares e ativação através de análise por citometria de fluxo - 160 hrs |
| Avaliação | A avaliação será realizada através de seminários. |