Objetivo Geral
O objetivo do curso é o aprendizado sobre a regulação da expressão gênica em tripanosomatídeos com foco no ciclo biológico do Trypanosoma cruzi, para a produção do protozoário expressando proteínas heterólogas EGFP ou Fluc, ferramentas necessárias para estudos sobre a progressão da doença e de busca de novos tratamentos.

Objetivos Educacionais/Aprendizagem
O aluno vai aprender sobre o ciclo biológico e necessidades bioquímicas do Trypanosoma cruzi, e como fazemos a manutenção das diversas formas do protozoário em laboratório, desda a cultura axênica até a manutenção da célula hospedeira infectada, quais as linhagens celulares utilizadas e procedimentos adotados em laboratório. O aluno também aprenderá sobre a regulação da expressão gênica em protozoários com foco nas sequências gênicas necessárias para a transcrição e tradução de proteínas, necessárias para a construção dos plasmídeos usados na clonagem e expressão de proteínas. O aluno terá conhecimento básico sobre a tecnologia do DNA recombinante, sobre clonagem de genes nos plasmídeos e sobre os métodos de produção de T. cruzi expressando proteínas heterólogas e suas aplicações na área de Saúde, para busca de compostos para tratamento. O aluno também será orientado sobre a interpretação e compreensão de textos científicos. 

Metodologia
Aulas expositivas, apresentação de seminários, aulas práticas e discussão dos resultados obtidos. Cultivo celular e de protozoários, ensaios de interação para avaliação das células infectadas com T. cruzi (amastigota) por microscopia de fluorescência e por microscopia óptica. Congelamento de células e protozoários. Cultivo da bactéria em meio líquido, para purificação do plasmídeo. Reação de PCR para amplificar o inserto com outras regiões importantes para a expressão do inserto (Fluc, ou EGFP) no Trypanosoma cruzi. Sequenciamento para avaliar o produto do PCR. Digestão com enzimas de restrição para clivagem do plasmídeo de expressão (pTREX) e do inserto (Fluc ou EGFP). Purificação dos produtos clivados em gel de agaraose para fazer a reação de ligação, seguida de transfecção em bactéria competente para seleção dos clones. A avaliação e seleção dos clones poderá ser realizada por PCR ou por enzima de restrição. Os protozoários expressando Fluc ou EGFP serão cultivados em lâmínula, fixados, incubados com DAPI ou corados com Giemsa e avaliados por microscopia de fluorescência ou microscopia óptica.

Avaliação
A avaliação será realizada através de seminário sobre o projeto desenvolvido e resultados obtidos.


Pre-requisitos: Graduação em andamento
Critérios para seleção: CV Lattes e Entrevista
Carga horária total: 320h
Carga horária semanal: 20 h
Início e término do curso: 04/05 a 31/08/2020
Bolsa auxílio: SEM BOLSA
Local de Realização do Curso: Laboratório de Biotecnologia e Fisiologia de Infecções Virais
Número de vagas: 01